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高性能外来体纯化和表征通过密度梯度超速离心和动态光散射


更快,更准确的外来体分析

使用外来体的研究人员的挑战包括手动设置密度梯度,因为它是乏味,耗时,并受用户,实验室和方法变异性的影响。还需要更大的尺寸和浓度分析的准确性。与此同时,该领域的专家呼吁建立标准协议。1我们通过成本效益,大规模纯化和快速分析外来体来为这些挑战提供解决方案。具体来说,Biomek 4000工作站有助于克服人为变量,并为梯度设置提供一致,可重复,高通量的方法,代表了扩大问题的突破性解决方案。Optima超速离心系统帮助研究人员保持运行之间的可靠性,使结果高度可重现。

虽然科学家已经知道胞外囊几十年,但**近才有技术能够区分外来体与微泡和凋亡体。膜囊泡的分类 - 以及它们分离的**合适和有效的方案 - 仍然是研究的强烈领域。当隔离囊泡时,使用能够分离囊泡的系统是**关重要的,以避免交叉污染。同时,需要增加尺寸和浓度准确度,以及增强工作流程。外来体是几乎所有细胞类型释放的膜囊泡(直径约30-120nm)。2,3它们可以在血浆和其他体液中自由获得,并含有蛋白质,mRNA和miRNA,代表它们分泌的细胞。如图4所示,5 外来体作为诊断以及治疗生物标志物已成为焦点。另外,外切体已经显示为细胞间通讯功能的一部分,对抗肿瘤和促肿瘤活性都有影响。6先前的工作已经提供了深入了解使用密度梯度超速离心,外来体的隔离2,7虽然有是获得纯化后的大小和浓度的更具体的确认的一种努力。

Beckman Coulter提供涵盖整个外来体工作流程的产品,使用自动化,离心和动态光散射(DLS)来纯化和分析外来体样品。Biomek 4000实验室自动化工作站帮助克服了人的变数,并为密度梯度设置提供了一致,可重复,高通量的方法 - 扩大障碍的优雅解决方案。制备性超速离心有助于保持运行之间的可靠性和高重现性。重要的是,使用Optima MAX-XP和Optima XPN的制备性超速离心达到将生物大分子样品及时分离到其密度梯度的等密度点所需的g力。DelsaMax CORE DLS平台用于级分的尺寸分析,因为外来体颗粒可以是:(1)在溶液中分析,(2)具有统计学意义,(3)与电子显微镜相比具有更少的成本和时间。而不是花几个小时来分析几百个粒子,DelsaMax核心能够在一分钟内分析和确定数千个外来体。

整个外来体制备工作流程概述如下。

步骤1-以对数期细胞密度-1×10 5细胞/ mL生长的Jurkat细胞

步骤2--台式离心机(Allegra X-15R)以除去细胞和细胞碎片/

步骤3-高速离心机(Optima XPN)以除去较小的细胞碎片。

步骤4-高速离心机(Optima XPN)沉淀外来体。

福建11选5走势图 步骤5 - Biomek 4000工作站设置密度梯度

步骤6-密度梯度超速离心(Optima XPN)以从共纯化的蛋白质和其他酵母囊泡分离外来体。

步骤7-高速离心机(Optima MAX-XP)将溶剂从碘克沙醇和蔗糖交换为磷酸盐缓冲盐水

步骤8-DelsaMax CORE用于尺寸测定和分析

参考文献

1. Simpson RJ和Mathivanan S.胞外微泡:需要国际公认的命名和严格的纯化标准。J Proteomics Bioinform。5:(2012)。

Van Der Pol E et al。用于检测和表征微粒和外来体的光学和非光学方法。血栓形成和止血杂志。8。12; 2596-2607:(2010)。

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